Residentes
Dra. Meredith Grey (Ellen Pompeo): La protagonista de la serie. Al final de la tercera temporada aprobó el examen para ser residente. Su vida es complicada: su madre, una gran cirujana, padece Alzheimer y muere, su jefe tuvo un romance con su madre, su padre (abandonado por su mujer) nunca tuvo una relación con ella y ahora la culpa de la muerte de su segunda esposa y ha aparecido su media hermana, Lexie, como interna. Todo esto afecta al carácter de Meredith y a su relación con el neurocirujano del Seattle Grace: Derek Sheperd.
Dra. Izzie Stevens (Katherine Heigl): Izzie es la que mas empatiza con sus pacientes. Primero se sintió atraída por su compañero Alex Karev, pero después se enamoró locamente de un paciente, Denny Duquette, el cual murió. A partir de ahí su vida se ha complicado mucho: dejó el programa durante un tiempo, después volvió y se enamoró (con sexo incluido) de su mejor amigo, George (que estaba en aquel momento casado) y tras volver con Alex descubrió, a través de las visiones con Denny, que tenía cancer; despues de una cirugía el Dr. Sheppard logra extirpar el tumor cerebral de Izzie pero debido a complicaciones sufre un paro cardiaco al final de la quinta temporada, al inicio de la sexta logran estabilizarla y es dada de alta del Hospital.
Dra. Cristina Yang (Sandra Oh): La mejor amiga de Meredith y residente especializándose en cirugía cardiotoráxica. Es sarcástica, atrevida, fría, soñadora y arrogante, además de una "yonqui de la cirugía" altamente competitiva. Tuvo una relación con el Dr. Burke, quien finalmente la dejó plantada en el altar. En la quinta temporada se enamora del nuevo jefe de trauma, el Dr. Owen Hunt, con el que comienza una relación.
Dr. Alex Karev (Justin Chambers): Aprobado por los pelos, Alex quiere especializarse en cirugía plástica o neo-natal. Mujeriego, aparentemente frío y engreído pero que también tiene su lado sentimental. Está obsesionado con el sexo. Ha tenido líos amorosos con algunas doctoras del hospital, como Izzie y Addison. Incluso tuvo un lío con la media hermana de Meredith, Lexie. Aunque también estuvo enamorado de Rebecca (a la cual llamaba Ava por desconocer el nombre), una paciente que rescató después de un accidente en el muelle. En la quinta temporada vuelve a tener una relación con Izzie que termina en boda.
Dra. Alexandra Grey "Lexie" (Chyler Leigh): Hermana de Meredith por parte de padre. Entra como interna en la 4ª temporada, con Cristina como residente. A mediados de la quinta temporada empieza una relación con Mark Sloan y en la sexta temporada se muda al apartamento de Sloan. A partir de la sexta temporada pasa a ser residente.
Dr. George O'Malley (T.R. Knight): George entró en el hospital junto a Meredith, Cristina, Izzie y Alex. En su primer año como interno consiguió acostarse con Meredith, de la que estaba enamorado desde el primer momento en que la vio, y tras salir mal esta aventura, comenzó una relación con Callie con la que se casó en Las Vegas. Tras engañar a su esposa con Izzie, su mejor amiga, se separó de ella. O'Malley suspendió el examen y tuvo que repetir el periodo de ser interno. Finalmente, demostrando lo cualificado que está (suspendió el exámen por un punto), consigue ser residente. George muere en el primer capítulo de la sexta temporada en la mesa de operaciones cuando es atropellado por un autobús al intentar salvar a una desconocida. El actor abandonó la serie por su mala relación con Shonda Rhimes (creadora de la serie).
Cirujanos
Dr. Derek Shepherd (Patrick Dempsey): Es un reputado neurocirujano que se mudó de Nueva York a Seattle después de que su mujer, Addison, le engañara con su mejor amigo, Mark Sloan. Está enamorado de Meredith desde el primer momento en que la vio. Al final de la tercera temporada rechaza el puesto de Jefe de Cirugía del Seattle Grace para tener una mejor relación con ella, después de ver lo que había pasado en el matrimonio del jefe. Es conocido como "McDreamy" entre los residentes. En la quinta temporada se casa (no legalmente) con Meredith Grey.
Dr. Richard Webber (James Pickens Jr.): Director y jefe de cirugía del Seattle Grace, Richard está totalmente obsesionado por su trabajo y el control de todo lo que sucede en su hospital. Está casado con Adele y en el pasado tuvo problemas con el alcohol y también con su mujer. En el pasado tuvo una relación extramatrimonial con la madre de Meredith, Ellis Grey.
Dra. Miranda Bailey (Chandra Wilson): Cuando los cinco (Meredith, Cristina, Alex, Izzie y George) entraron como internos de primer año, Bailey fue su residente. Ahora es cirujana de cirugia general. Está recién separada y tiene un hijo pequeño.
Dr. Mark Sloan (Eric Dane): Es un prestigioso cirujano plástico cuyo atractivo no pasa inadvertido entre las trabajadoras del Seattle Grace Hospital. Siendo mejor amigo de Derek, Mark se acostó con Addison, forzando así que Derek se marchara a Seattle. En la 3ª temporada revela que el verdadero motivo por el que acudió al hospital fue porque quería recuperar su amistad con Derek. Es conocido como "McSteamy" (Doctor Caliente) entre los internos. En la quinta temporada termina oficializando su relación con Lexie Grey (media hermana de Meredith).
Dr. Owen Hunt (Kevin McKidd): Tras salvarle la vida a un paciente en la carretera, el médico militar Owen Hunt obtiene un puesto en el Seattle Grace. Sin que su familia sepa que ha vuelto de Iraq y con una crisis encima, Hunt y Cristina se enamoran e inician una relación llena de obstáculos.
Dra. Arizona Robbins (Jessica Capshaw): Es la nueva jefa de cirujía pediátrica. Divertida y siempre viendo el lado bueno de la cosas, Arizona está enamorada de Callie Torres, relación que el padre de ella se niega a aceptar y que provoca que él la desherede de todo el dinero que tiene en el banco con la promesa de devolvérselo cuando termine la relación homosexual. Arizona también es muy amiga de la Dra. Bailey.
Dra. Calliope Torres "Callie" (Sara Ramírez): La ex esposa de George es experta en cirugía ortopédica. Tras darse cuenta de que su marido le era infiel con Izzie, Callie obtiene (durante poco tiempo) el puesto de jefa de residentes, aunque debido a su ineptitud para llevar el peso que supone, el puesto pasa a manos de Bailey. En el terreno amoroso, ha tenido una relación homosexual con Erica Hanh (que se marchó del hospital) y ahora mantiene otra con Arizona Robbins. En la temporada seis deja el Seattle Grace ya que el jefe Webber no le dio el puesto de cirujana y comenzo a trabajar en el Mercy West.
Dr. Preston Burke (Isaiah Washington): Burke era uno de los mejores cirujanos cardiotoráxicos de Estados Unidos. Aspiraba a ser jefe de cirugía del hospital y era muy ambicioso. Es aficionado a la cocina y a la música, especialmente el jazz.. Tras no ser nombrado jefe de cirugía y no estar seguro de su boda con Cristina decidió abandonarlo todo. El actor dejó la serie por un escándalo que se formó al llamar a su compañero, Knight, "marica".
Dra. Addison Montgomery (Kate Walsh): Especialista en cirugía neo-natal y ginecóloga de gran reputación, Addison inicia su trajectoria en el Seattle Grace con un doble objetivo: ayudar a Webber en un caso y recuperar a su marido, Derek. El tiempo pasa y Addison supera su ruptura y tras ir y venir con su ex amante (Sloan), acaba sintiendo algo por Karev. Finalmente decide dar un cambio de aires y marcharse con sus amigos a L.A. La actriz dejó la serie porque le propusieron ser la protagonista del spin-off de Anatomía de Grey en España.
Dra. Erica Hahn (Brooke Smith): Tras la marcha del Dr. Burke, es contratada como la nueva cirujana cardiotoráxica del Seattle Grace en la 4ª temporada. Rival de Burke desde los tiempos de la facultad, la Dra. Hahn ya hizo algunas participaciones en la segunda y tercera temporadas de la serie. Mantuvo una relación con Callie Torres. La actriz dejó la serie "porqué el personaje no daba mas de sí".
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